实验七  果蔬中维生素C的测定

一、目的与要求：

1、了解蔬菜、水果中维生素 C 含量情况，以及果蔬中维生素C 的提取方法。

2、掌握 2，6—二氯靛酚滴定法测定果蔬中维生素 C 的原理、基本过程和操作关键。

3、熟练采样、样品处

理、称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。

4、掌数据处理和结果计算技术。

二、实验方法：

1、原理：

2、6—二氯靛酚是一种染料，其颜色反应表现为两种特性。一是取决于氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态为无色；二是受其介质酸度的影响，在碱性介质中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性染料标准液，滴定含 VC 的酸性浸出液时，染料可氧化维生素C 而本身被还原为无色的衍生物，达到终点时，稍过量的染料在酸性介质中呈浅红色，即为终点。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2.6-二氯酚靛酚的量与样品中所含还原型维生素 C的量成正比。根据染料液消耗量可计算出试样中还原型抗坏血酸的含量。

2、试剂：

①、20g/L草酸溶液

②、10g/L草酸溶液

③、异戊醇

④、维生素C 标准液的配制与标定（预备组同学已经完成）

1）维生素 C标准贮备液的配制(0.2mg/mL)：精密称取 20mg纯 L-抗坏血酸，用10g/L草酸溶解，并定容至100mL。置冰箱中保存。

2）维生素 C标准使用液的配制(0.02mg/mL)：吸取维生素 C 标准贮备液5mL 于 50mL容量瓶中，用10g/L草酸溶液定容。

3）标定：准确吸取上述维生素 C 标准使用液5.0mL于 50mL 锥形瓶中，加入60g/L碘化钾溶液 0.5mL， 10g/L淀粉指示剂3 滴，混匀后用 0.0010mol/L 碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色。重复操作三次，取平均值计算 L-抗坏血酸的浓度。

抗坏血酸浓度（mg/mL）=  （ V1×0.088）/ V2                式中：

V1：滴定时消耗1.67×10-4mol/L碘酸钾标准溶液的体积，mL；

V2：吸取抗坏血酸标准使用液的体积，mL；【5mL】

0.088：0.001mol/L碘酸钾 1mL 相当于维生素C 的毫克数，(mg／mL)。

⑤、2、6—二氯靛酚的配制与标定：

配制：称取52mg 碳酸氢钠（NaHCO3），溶解于 200mL热蒸馏水中，然后再称取50mg2,6-二氯靛酚钠溶解于上述碳酸氢钠溶液中，冷却后，冷却，移入 250mL 容量瓶中,蒸馏水定容，次日过滤于棕色瓶中，贮于冻箱，每周至少标定—次。

标定：吸取5.00mL已知浓度的维生素C 标准使用液于 50mL 锥形瓶中，加入10g/L草酸溶液 5mL，摇匀，用 2.6—二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色，且 15s 不褪色即为终点。

同时，另取10g/L草酸溶液 10mL 做空白试验。重复操作三次，取平均值汁算出每mL 染料液相当的维生素C 毫克数。

式中：

T —每毫升染料溶液相当于Vc的毫克数=滴定度(T)

C—维生素C 标准使用液的浓度，mg/ mL；

V—标定时吸取维生素 C 标准使用液的体积，mL；

V1—滴定抗坏血酸溶液消耗 2，6—二氯靛酚的溶液的体积，mL。

V2—滴定空白所用 2，6－二氯靛酚溶液的体积, mL。

3、实验仪器：

仪器：组织捣碎机、分析天平、滴定管、200mL 容量瓶、10mL 移液管、烧杯、漏斗、锥形瓶(100mL)

4、操作方法：

①、样液制备

1）鲜样制备：称100.0g鲜样，放入组织捣碎机中，加2％草酸 100mL迅速捣成匀浆。取10.0～40.0g匀浆(使其含有抗坏血酸1-5mg)，用 1％草酸定容至 100mL 容量瓶中，（若有泡沫可加入 2 滴辛醇除去），摇匀放置 10min过滤，弃去最初毫升滤液。若滤液有颜色，可按每克样品加0.4g 白陶土脱色后再过滤。

2）多汁果蔬样品制备：榨汁后，用棉花快速过滤，直接量取10～20mL汁液（含抗坏血酸 1～5mg），立即用 1％草酸浸提剂定容至 100mL，待测。

②测定：吸取5mL 或 10mL滤液于 100mL 三角瓶中，用已标定过的2,6-二氯靛酚钠溶液滴定，直到溶液呈粉红色15s 不褪色为止。同时做空白试验。

5、计算：

式中：

X—样品中还原型维生素C 的含量，mg/100g；

T—1mL染料溶液 (2,6—二氯靛酚溶液) 相当于维生素C 的质量，mg；

V—滴定样液时消耗染料溶液的体积，mL；

V0—滴定空白时消耗染料溶液的体积，mL；

m—称取匀浆相当于原样品的质量，g。

平行测定的结果用算术平均值表示，取三位有效数字，含量低的保留小数点后两位数字。平行测定结果的相对误差，在维生素 C 含量大于20mg/100g时不得超过2%，小于20mg/100g时不得超过5%。

6、说明：

(1)所有试剂最好用重蒸馏水配制。

(2)一般抗坏血酸纯度为99.5%以上可不标定。如试剂发黄则弃去不用。

(3)样品取样后，应浸泡在已知量2％草酸溶液中，以免抗坏血酸发生氧化受损失。2％草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用，而 1％草酸无此作用。

(4)对动物性的样品可用10％三氯醋酸代替 2％草酸溶液提取；对含有大量Fe 的样品，如储藏过久的罐头食品可用 8％醋酸溶液代替草酸溶液提取。

(5)整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。

(6)若样品滤液无色，可不加白陶土。须加白陶土的，要对每批新的白陶土测定回收率。加白陶土脱色过滤后，样品要迅速滴定。

(7)滴定开始时，染料溶液要迅速加入，直至红色不立即消失，尽可能一滴一滴地加入，并要不断振动三角烧瓶，直至粉红色于15 秒内不消失为止。样品中可能有其他杂质也能还原2.6-二氯靛酚，但一般杂质还原该染料的速度均较抗坏血酸慢，所以滴定时以 15秒钟红色不褪为终点。

(8)测定样品溶液时必须同时作一空白对照，样品溶液滴定的毫升数须扣除空白液滴定的毫升数。